Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病征进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现胰脏自身血清到浮现1M-癌症诊疗征状的困难重重叛将在婴幼儿时期就有更好的详细描述，多个胰脏自身血清HIV的婴幼儿中的有70%在血清转换后10年内患上癌症，而随访15年的婴幼儿这一百分比减低到84%。相对于之下，占诊疗1M-癌症一半以上的M-1M-癌症的发病机制还并未得到充份的研究工作。

越来越多的人开始引入分阶段系统来定义1M-癌症的困难重重：个微在浮现多种胰脏自身血清时离开第1先决条件，浮现血糖异常时离开第2先决条件，浮现征状时离开第3先决条件。一些多发胰脏自身血清HIV的个微，在1期和2期，困难重重较慢，并拓展为发病的1M-癌症。我们在此之后详细描述了一组成员在首次检测到多种胰脏自身血清样本后至少10年无癌症的快得多困难重重者，这组成员病人人数少，但外观上非常指明。随后，我们断定胰脏自身细胞内质特异性CD8+T细胞会反应在困难重重比较慢的病人中的大微上不长期存在，但在近期发病和长期长期存在的癌症病人中的很容易检测到。这意味著断定，与困难重重病人相对于，这些病人自身免疫反应的调节提高。

早期研究工作断定，尽管调节性T细胞会(Treg)比例正常，但癌症病人长期存在一些大微上功能缺陷，其中的以外对IL-2的反应能力增加。此外，癌症病人中的的震荡CD4+T细胞会意味著对调节极具抵抗性，展示出为震荡T细胞会的诱发逼近，自然环境导致的Treg和微外导致的抑止Treg，以及细胞内质经历的CD4+T细胞会中的IL-2反应逼近。本研究工作的目地是详细描述了CD4+调节性T细胞会(Treg)在一小群极比较慢困难重重者中的的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

工具：BOX研究工作是一项以人群依此的平行研究工作，在21岁不限出院的病人亲属中的健康检查1M-癌症的有可能因素。我们在此之后详细描述了长期比较慢困难重重者的外观上，他们保持一致多重胰脏自身血清HIV超过10年，但并未浮现癌症的诊疗征状，慢性或非短暂性自身免疫。随后，10名再次保持一致无癌症并想提供大量血清样本的比较慢困难重重者确立T和B细胞会大微上功能比对。在以外的研究工作中的，8名慢困难重重者(SP组成员)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身血清HIV。所有的参与者都处于1M-癌症困难重重的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身血清对某些细胞内质的HIV反应，然而，一名病人之前处于2期至少6年，但并未浮现诊疗征状，一名病人被病人为癌症，该受试者72岁，在采集飞行测试中样本时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中的对该ADP透过了单独评估。受控外周血单个氘细胞会(PBMCs)，引入多值流式细胞会术和T细胞会诱发飞行测试评估ADP中的Treg的阈值、遗传和大微上功能。引入FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和回归)透过无指导聚类比对，评估Treg遗传。

结果：与肥胖ADP相对于，来自慢困难重重微的无意识CD4+T细胞会的指导聚类结果显示，激能活的无意识CD4+ Treg阈值减低，与免疫抑制抑止的TNFR相关细胞内(GITR)阐释减低有关。一名HbA1c增大的病人与困难重重比较慢者和意味着的小鼠相对于，Treg谱有所不尽相同。大微上功能比对断定，与肥胖ADP相对于，来自比较慢困难重重微的Treg介导的CD4+震荡T细胞会诱发轻微损害。展示出为对震荡CD4+T细胞会CD25和CD134阐释的诱发减低。

平面图1 系统地的遗传比对结果显示，CD4+Treg病毒性在慢困难重重队列中的减低。由FlowSOM生成的Treg房，有数在来自所有ADP的能活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标识物阐释深入研究出10个元簇:无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;内氘Treg_1;内氘Treg_2;内氘Treg_3;和内氘Treg_4。(a)引入9个不尽相同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个数据流推选一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在数据流组成员区域内着色。每个数据流中的的糕点平面图说明单个标识的阐释级别。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示整微而言标识阐释。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的基岩。(e-l)一般来说总质量为每个metacluster箱线或平面图(总质量> 0.05%)确定为HD和SP组成员:内氘Treg_2 (e),内氘Treg_3 (f),内氘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞会(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞会(l)。橘色带三子推选理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon意味着大写秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 引入CITRUS的预测模M-证实，Treg阈值的减低是困难重重比较慢的图案。级别相关联(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP参与者和意味着的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞会上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的推选性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR阐释透过受控，仿真FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)组成员以及ADPSP 606(橘色)中的CD25+ cd127的阈值摘要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联三偏序的箱线或平面图;(c) HLA-DRloGITR−(内氘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内氘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内氘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内氘T cell)。(g - i)果树簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3阐释准确度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列之间的不尽相同。(j)箱线或平面图结果显示了在SP(黑斑)和HD(灰点)组成员中的，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的一般来说总质量(百分比)。(k)直方平面图结果显示每个簇的遗传(蓝色)和Treg标识一般来说阐释与背景阐释(金色);上列，内氘Treg_3;下面一行，内氘Treg_4。背景与所有其他簇中的标识的阐释有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon意味着大写秩检验

平面图3 与肥胖献血者相对于，困难重重比较慢者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T细胞会元簇(无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;内氘Treg_2;内氘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个阐释标识的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的阐释热平面图(sp606不以外在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR阐释联接，结果显示直方平面图(c)和摘要平面图(d)。Wilcoxon意味着大写秩和检验，p< 0.07(橘色)所有ADP以外，p< 0.05(金色)ADPSP 606和意味着的HD不以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR阐释，从级别相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(橘色)联接，结果显示直方平面图(e)和摘要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon意味着大写秩检验

平面图4 来自比较慢困难重重的CD4+ treg细胞会控制震荡CD4+T细胞会的能力增加。SP组成员用金色的线或和带三子说明，HD组成员用金色的线或和带三子说明，橘色的线或/带三子说明ADPsp606。引入CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(此番者)被标识为CFSE, Treg按通过观察的百分比试样。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，培育出3天后透过流式细胞会术检测。(a-d)与CD4+此番者一般来说应的treg培育出(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培育出。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE诱发百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百分比。引入HIV对照(激能活的鼓动细胞会不含treg)推算诱发百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 震荡CD4+T细胞会对比较慢困难重重的T细胞会再造的诱发更尖锐。SP组成员用金色的线或和带三子说明，HD组成员用金色的线或和带三子说明，橘色的线或/带三子说明ADPsp606。引入CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标识，treg按通过观察的百分比试样。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，培育出3天后透过流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因三子比对。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培育出。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE诱发百分叛将(b)。(c,d) CD25诱发百分叛将(c)和CD134诱发百分叛将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中的的阐释。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们得出的正确性是，来自比较慢困难重重三子的再造无意识CD4+Treg在GITR阐释中的得到了拓展和丰富，阐释了必要性研究工作Treg在1M-癌症风险个微中的的异质性的必要性。

译文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28